بهینه سازی انتقال ژن هیگرومایسین فسفوترانسفراز به قارچ دکمه ای سفید agaricus bisporus از طریق باکتری آگروباکتریوم تو می-فاشینس

قارچ خوراکی دکمه ای سفید (agaricus bisporus) با تولید سالیانه 5 میلیون تن، از مهم ترین محصولات باغبانی به شمار می آید. این قارچ علاوه بر نقش مهمی که در تغذیه انسان دارد، در صنعت و پزشکی نیز حائز اهمیت می باشد. با وجود ارزش اقتصادی بالا و اهمیت بیوتکنولوژیک این قارچ، روش های اصلاحی سنتی بر روی این قارچ بدلیل چرخه زندکی خاص آن و نیز به دلیل تنوع ژنتیکی پایین در بین لاین های تجاری آن، بسیار مشکل است. لذا در این-گونه موارد تراریزش ژنتیکی راهگشا می باشد. در این تحقیق به منظور بهینه سازی انتقال ژن در قارچ دکمه ای سفید از روش تراریزش با واسطه باکتری آگروباکتریوم تومی فاشینس برای انتقال موثر ژن گزینشگر هیگرومایسین فسفوترانسفراز (hph) استفاده شد. همچنین بیان ژن gus در نمونه های تراریخته مورد آزمایش قرار گرفت. بدین منظور از دو ریزنمونه تیغه و کلاهک و دو تیمار خلاء سرمایی و گرمایی استفاده گردید. آزمون مقدماتی تحت شرایط خلاء گرمایی نشان داد که هیچ یک از ریز نمونه های کلاهک روی محیط کشت انتخابی حاوی آنتی بیوتیک هیگرومایسین رشد نکردند، اما تراریزش ریزنمونه های تیغه موفقیت آمیز بود و پس از آزمون pcr برای تایید حضور ژن های hph و gus، نرخ تراریزش در این ریزنمونه برابر با 33/0% بود. در آزمایش تکمیلی نرخ تراریزش ریزنمونه های تیغه پس از آزمون pcr برای ژن های hph و gus، به ترتیب 45/5% و 99/0% بود. در کلنی میسلیومی حاصل از ریزنمونه های تراریخته هیچ گونه تغییر رنگی پس از آزمون هیستوشیمیایی برای بررسی بیان ژن gus رویت نگردید. انجام آزمون rt-pcr حاکی از این بود که در ریزنمونه-های تراریخته از روی ژن gus، رونویسی انجام شده و mrna ساخته می شود اما منجر به تولید پروتئین نمی شود که دلیل آن به علت فقدان اینترون در ژن مربوطه بود.